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掌握方法合理使用ELISA試劑盒

發(fā)布時(shí)間: 2022-04-22  點(diǎn)擊次數(shù): 965次
  ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),已知濃度的規(guī)范品、不知道濃度的樣品參加微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢查。先將生物素符號(hào)的抗體一起溫育。洗刷后,參加親和素符號(hào)過(guò)的HRP。再通過(guò)溫育和洗刷,去掉未的酶物,然后參加底物A、B,和酶物一起效果。產(chǎn)生色彩。ELISA試劑盒色彩的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
 
  ELISA試劑盒的使用方法:
 
  一、雙抗體夾心法
 
  1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
 
  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
 
  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
 
  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
 
  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
 
  二、間接法
 
  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜;
 
  2.次日洗滌3次;
 
  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
 
  4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)二抗體(抗抗體)0.1ml;
 
  5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
 
  6.較后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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