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對(duì)于生化試劑盒的使用你做的正確嗎?看這里!

發(fā)布時(shí)間: 2022-05-25  點(diǎn)擊次數(shù): 704次
  生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑,前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀,使用方便,缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比,雙試劑提高了抗干擾能力,具有穩(wěn)定性能較好,可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測(cè)組合試劑、濃縮試劑等。
 
  生化試劑盒的操作流程如下:
 
  (1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
 
  (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
 
  (3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
 
  (4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
 
  (5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 
  (6)洗板,同(4)。
 
  (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
 
  (8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 
  (9)洗板,同(4)。
 
  (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
 
  (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
 
  (12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
 
  (13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

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