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深入分析下生化試劑盒的測試原理

發(fā)布時(shí)間: 2022-10-25  點(diǎn)擊次數(shù): 701次
  生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、氨基酸蛋白、糖酵解、無機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀。
 
  生化試劑盒的反應(yīng)原理:
 
  對(duì)于延遲區(qū)來講,無規(guī)律可尋,對(duì)于指標(biāo)檢測沒有意義。
 
  等速區(qū)對(duì)應(yīng)的指標(biāo)檢測方法是速率法。速率法又稱連續(xù)監(jiān)測法,是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時(shí),連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期內(nèi)4個(gè)以上測光點(diǎn)作為讀數(shù)點(diǎn),并以單位時(shí)間吸光度變化值計(jì)算結(jié)果。線性期就是此期間內(nèi)各測光點(diǎn)之間的吸光度差值相等,此線性期對(duì)酶促反應(yīng)的底物來說屬于零級(jí)反應(yīng)。其測光點(diǎn)一般設(shè)置在加入啟動(dòng)因子并孵育一段時(shí)間后開始,持續(xù)1-3min,一般應(yīng)用于酶類項(xiàng)目,可以使用因數(shù)法來計(jì)算待測濃度。
 
  過渡區(qū)對(duì)應(yīng)是固定時(shí)間法,是終點(diǎn)法中存在一種特殊情況,指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn),此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非平衡點(diǎn)吸光度,這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。目的是解決某些化學(xué)反應(yīng)的非特異性問題,提高準(zhǔn)確度。
 
  平衡區(qū)對(duì)應(yīng)的是終點(diǎn)法,按測光點(diǎn)的個(gè)數(shù)分為:一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法。
 
  一點(diǎn)終點(diǎn)法是指在反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn),即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí),選擇一個(gè)測光點(diǎn)計(jì)算待測物質(zhì)濃度。
 
  兩點(diǎn)終點(diǎn)法常應(yīng)用于雙試劑的測定項(xiàng)目中,多數(shù)一試劑通常只含緩沖液等成分,它與樣本一般不起特異性反應(yīng);因此在二試劑加入前,選擇一個(gè)測光點(diǎn)作為第一讀數(shù)點(diǎn),此時(shí)的吸光度相當(dāng)于樣品空白。加入二試劑后待測物質(zhì)起反應(yīng),并經(jīng)過一定時(shí)間反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn),此時(shí)選擇二個(gè)讀數(shù)點(diǎn),兩讀數(shù)點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算待測物質(zhì)濃度。
 
  兩點(diǎn)法能有效消除樣品溶血、黃疸、脂濁等造成的光吸收干擾。如:酶法測定葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐,以及化學(xué)法測定總蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、鈣、磷、鎂、鐵等;并且都能在加入第二試劑后的2-5 min內(nèi)達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)。

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