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大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒的試劑如何正確準備?

發(fā)布時間: 2022-10-19  點擊次數(shù): 644次
  大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒是一個對滋養(yǎng)層細胞功能有自分泌作用和對血管生長有旁分泌作用的蛋白。
 
  大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒試劑的準備方法:
 
  1.使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
 
  2.標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度,標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
 
  3.濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
 
  大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒的操作步驟:
 
  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 
  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;樣本孔加待測樣本50μL。
 
  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
 
  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 
  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
 
  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
  結(jié)果判斷繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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